原位雜交（FISH三標(biāo)）

服務(wù)介紹：

原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)采用三種標(biāo)記不同熒光素的不同探針，同時檢測一個樣本。適用于各類細(xì)菌檢測和其他基因檢測。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、污泥切片固定：切片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

2、消化：基因筆畫圈，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。.

3、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h。

4、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針1，探針2，探針3雜交液，37度雜交過夜。

5、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌

6、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。

7、熒光全景掃描。　

送樣要求：

1、切片前處理要求：新鮮組織干冰運(yùn)輸后做冰凍切片；或取2mm左右厚度的新鮮組織，5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定，4℃低溫保存運(yùn)輸，切勿冷凍結(jié)冰，盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實(shí)驗(yàn)，固定時間過長影響核酸檢出率；

2、冰凍切片：冰凍切片-20℃運(yùn)輸；

3、石蠟切片：石蠟切片常溫運(yùn)輸；

4、細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后，換無酶PBS，密封，4℃運(yùn)輸。 

單據(jù)填寫：

1、探針合成：需提供待測目的基因序列或基因登錄號、所需標(biāo)記類型；

2、自帶探針需告知完整探針信息；

3、寫明檢測要求。