明膠酶譜法MMP-2&MMP-9檢測試劑盒檢驗原理

信帆生物主營產(chǎn)品: 質(zhì)控品，干擾物質(zhì)，抗體抗原，elisa試劑盒，動物血制品，生化試劑盒等。實驗代做服務(wù)：HE染色/特殊染色/技術(shù)服務(wù)、免疫組化實驗服務(wù)、Western blotting實驗服務(wù)、RT-PCR實驗技術(shù)服務(wù),QPCR(熒光定量PCR）、酶聯(lián)免疫ELISA、生化測試、液相氣相檢測等。

簡介：

基質(zhì)金屬蛋白酶 (MMP) 屬于金屬蛋白酶家族，該家族由至少 20 個成員組成，并且已知參與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的代謝?；|(zhì)金屬蛋白酶是一類活性依托鋅、鈣離子發(fā)揮作用的蛋白水解酶，在生物體內(nèi)分布廣泛。這類酶核心作用為分解代謝細(xì)胞外基質(zhì)物質(zhì)，深度參與胚胎生長發(fā)育、機(jī)體組織修復(fù)、創(chuàng)面愈合以及血管新生等生理活動，保障機(jī)體組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)維持正常狀態(tài)。該物質(zhì)的活性水平處于動態(tài)調(diào)控之中，一旦表達(dá)量與活性出現(xiàn)異常紊亂，就會損傷組織固有屏障。其功能失調(diào)和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、關(guān)節(jié)病變、血管硬化、器官纖維化等諸多病癥息息相關(guān)，酶與體內(nèi)抑制物質(zhì)相互制衡，共同守護(hù)機(jī)體生理運(yùn)作平衡。MMP 可通過酶譜法廣泛檢測。本試劑盒提供了一個簡單的酶譜電泳系統(tǒng)，用于檢測血液、體液、分泌物、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)基等樣品中的MMP2,MMP9酶譜及活性。

檢驗原理：

本方法借助 SDS - 聚丙烯酰胺凝膠電泳聯(lián)合凝膠染色技術(shù)，能夠同步檢測 MMP-2、MMP-9 活性以及無活性前體酶原譜系，檢測靈敏度可達(dá)nM級別，檢測性能優(yōu)于 ELISA 檢測方式。

實驗預(yù)先制備混合明膠底物的電泳凝膠，將待測生物樣本加入凝膠體系完成電泳分離。電泳體系內(nèi)的SDS可與基質(zhì)金屬蛋白酶可逆結(jié)合，破壞蛋白空間構(gòu)象，暫時抑制酶的水解活性，保障蛋白依據(jù)分子量差異完成有效分離。電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer孵育，MMP恢復(fù)活性，凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。