λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒如何正確使用

上海信帆生物公司的λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒，操作簡(jiǎn)單，價(jià)格實(shí)惠，資料穩(wěn)定。是簡(jiǎn)便的λ噬菌體基因組DNA的試劑盒，其提取原理是通過PEG沉淀、酚異戊醇等提取，殘留碎片通過沉淀離心去除，通過一系列快速的漂洗、離心步驟，將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除。

獲得λ噬菌體基因組DNA，可進(jìn)行酶切、PCR等下游實(shí)驗(yàn)，獲得DNA的量很高，但是純度一般，但是足夠用于大多數(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

噬菌體載體廣泛用于文庫(kù)篩選，目的克隆培養(yǎng)獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來開展測(cè)序等后續(xù)工作。λ噬菌體裂解培養(yǎng)物離心后的上清，首先用RNaseA/DNaseⅠ混合酶消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA,沉淀收集噬菌體。

λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒如何正確使用

1、用于裂解的噬菌體、宿主菌越新鮮，裂解越好、收獲量越大。

2、液體培養(yǎng)裂解時(shí)，到了時(shí)間裂解還沒發(fā)生，可適當(dāng)?shù)奶岣邷囟然蚣哟笳駬u速度。

3、RNase/DNase消化過度，可能減少產(chǎn)量；消化不*，可粘走部分噬菌體。

4、噬菌體裂解液在低溫下易結(jié)晶析出白色物質(zhì)，可37℃溫浴至*溶解。

λ噬菌體是長(zhǎng)尾噬菌體科的一種溫和噬菌體。λ噬菌體是雙鏈DNA噬菌體，有直徑55nm的二十面體頭部，末端有細(xì)長(zhǎng)尾絲的非收縮尾。DNA是線性分子，有黏性末端即單鏈延伸12個(gè)核苷酸，故感染后線性基因組可立即環(huán)化。

λ DNA有一個(gè)噬菌體結(jié)合位點(diǎn)，可與細(xì)菌結(jié)合位點(diǎn)形成堿基配對(duì)，細(xì)菌結(jié)合位點(diǎn)位于大腸桿菌染色體上半乳糖或gal操縱子和生物素操縱子之間。兩個(gè)位點(diǎn)配對(duì)后，整合酶在一種特異宿主蛋白的輔助下催化病毒和細(xì)菌DNA鏈和物理交換，環(huán)狀λ DNA以線性整合進(jìn)大腸桿菌DNA上毗鄰gal操縱子的位置，稱之為前噬菌體。

λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒如何正確使用